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透析袋的預處理和存儲方法
瀏覽次數:813發布日期:2021-05-19

為防干裂,出廠前透析袋一般都經10%的甘油處理,透析袋中含有微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質,它們對蛋白質和其他生物活性物質有害,用前必須除去。新購進的普通型透析袋必須經過處理才能使用。

一、透析的原理
透析只需要使用專用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內,將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內,而鹽和小分子物質不斷擴散透析到袋外,直到袋內外兩邊的濃度達到平衡為止。保留在透析袋內未透析出的樣品溶液稱為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動力是擴散壓,擴散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質在膜內外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。


二、透析袋的預處理
方法一:
把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段。
在大體積(500ml)的2%(w/v)的碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中將透析袋煮沸10min。
用蒸餾水徹底清洗透析袋。
放在500ml的1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中將之煮沸10min。
冷卻后,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內。從此時其取用透析袋必須戴手套。
在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗干凈。

方法二:
可先用50%乙醇煮沸1h,再依次用50%乙醇、0.01mol/L碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA(pH=8.0)溶液洗滌,最后用蒸餾水沖洗即可使用。

方法三:
實驗要求不高的可以用簡易方法處理。用沸水煮5至10min,再用蒸餾水洗凈,即可使用。
不過現在也有雜質含量極少,無需預處理,只需用去離子水清洗即可使用的即用型透析袋。這種透析袋具有特殊的生物技術膜,不含硫化物及金屬雜質。只是比普通型透析袋稍貴。

三、三種不同類型的透析袋
普通型透析袋
1.把透析袋剪成適當長度(10-20cm)的小段;
2.在大體積的2%(W/V)碳酸氫鈉和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將透析袋煮沸10分鐘;
3.用蒸餾水徹底清洗透析袋;
4.放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中將之煮沸10分鐘;
5.冷卻后,存放于4度,必須確保透析袋始終浸沒在溶液內。從此時起取用透析袋是必須戴手套;
6.用前在透析袋內裝滿水然后排出,將之清洗干凈;

再生纖維素透析袋:
此類型透析袋可耐受pH范圍是2.0~12.0;耐受溫度是4~60℃;不能煮,也不需要煮,只需用純水徹底沖洗即可。

纖維素透析袋:
此類型透析袋可耐受pH范圍是2.0~9.0;耐受溫度是4~37℃;不能煮,也不需要煮,只需用純水徹底沖洗即可。

 

三、透析袋的選擇
1.確定透析袋的分子量
在選擇適合截留分子量之前,首先要明確:欲保留在透析袋中的樣品和想要除去的雜質的分子量。
2.選擇普通型,再生型,or纖維素透析袋
確定好分子量之后,根據實際情況,樣品溶劑等,選擇透析袋。
3.正確選擇扁平寬度
透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。較小的透析管透析更快;較大的透析管因擴散距離較長透析較慢。為易于使用,建議使用總長(包括閉合夾和頂部空間)為大約10-15cm的透析袋。

 

四、透析袋的使用
下述透析程序是一個普遍的基礎透析過程。在開始透析之前應考慮到許多變數。透析樣品溶劑、膜的化學相容性、膜的截留分子量,透析溶劑、透析體積、溫度等變量都會影響透析速率,因此,一些應用中下述透析過程可能需要適當的變化。
1.把適量的透析液(緩沖液)加入透析裝置。透析液的體積應為樣品體積量的100倍。(例如:在一升透析液中透析10毫升的樣品)
2.裁剪適當長度的透析管。預留一段額外長度(約占總樣品體積量的20%)作為頭部空間。
3.把透析管插入打開的透析夾,在約超出透析夾3-5毫米的位置再夾住,不要折疊透析袋。
4.由透析管開口端將樣品裝入。調整一下頂部空間的長度,夾緊透析夾。
5.把透析樣品放在合適的透析緩沖液中。
6.透析要根據具體的應用需求。通常情況下,允許過夜透析。在持續透析的過程中,至少要進行3次全部更換透析液。建議在(透析后)2-4小時,6-8小時和10-14小時(第2天早晨)更換透析液。在最后一次透析液的更換后要至少繼續進行2小時的透析。

 

五、透析袋的存儲
1.透析袋不能在純水中長期儲存,會長菌,用0.05%die氮化鈉溶液儲存。
2.樣品按推薦的單位長度容量加樣,不可多加,樣品濃度不可太大,否則容易導致膜漲破。
3.樣品和透析液體積比一般是1:50~500
4.對于高濃度污染物,樣品可能需要較長的時間透析,透析液需要更頻繁的更換。
5.透析溫度主要取決于樣品。溫度限制主要取決于膜的類型。纖維素透析袋可以承受的溫度高達37℃,再生纖維素透析袋可以承受的溫度高達60℃。

六、使用注意事項
在適當的儲存情條件下,保質期為兩年。干燥的透析袋要在室溫或4℃儲存在聚y烯袋中。一旦變濕,透析袋應浸泡在下列之一的溶液中:0.05%die氮化鈉,1%苯jia酸鈉或1%甲醛。(備注:一旦變潮濕,不要讓透析袋干燥。不斷干燥會造成孔隙結構不可恢復的倒塌)

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