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細胞分離液使用操作該如何進行?
瀏覽次數:178發布日期:2021-08-06
  細胞分離液是一種經過聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆粒,經過高速離心后可形成連續密度梯度,由于擴散常數低,所形成的梯度十分穩定。分離液不穿透生物膜,對細胞無毒害,因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒,還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。
  細胞分離液使用操作步驟:
  1、取新鮮抗凝全血或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。
  2、在離心管中加入適量分離液,將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。
  3、室溫,水平轉子500~1000g,離心20~30min。
  4、離心后將出現明顯的分層:上層是稀釋的血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層,離心管底部是紅細胞與粒細胞。
  5、小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中,10mLPBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。
  6、棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心十分鐘。
  7、再次棄上清,5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞,250g,離心十分鐘。
  8、棄上清,細胞重懸備用。
  細胞分離液裝樣與取樣方法:
  裝樣時樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異,一般加樣體積不宜過大,細胞濃度也不可過高,否則會影響細胞的分離和回收。
  取樣:當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時,可逐層去除液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細胞經兩次洗滌后可供培養或檢測用。


細胞分離液

 

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