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淺析細胞分離液的配置與使用
瀏覽次數:112發布日期:2021-09-23
  細胞分離液快速操作和使用及保存中的注意事項:
  1、分離液和所分離樣本一定在二十℃水浴箱中復溫二十分鐘,保證分離液和所分離樣本溫度的分離效果。
  2、使用無靜電反應的離心管,推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。
  3、所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
  4、抗凝劑選擇:EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積。

  細胞分離液的配置與使用:
  1、不同濃度(密度)分離液的制備: 先用分離液與NaCl或1.5MPBS混合達到生理性滲透壓,然后用生理溶液稀釋到所需濃度。
  2、不連續密度梯度層的制備: 先將試管壁用牛血清濕潤,除去多余血清,這種預處理可使逐層疊加的液平穩沿管壁流下,使形成滿意的界面。在制備過程中一般用長針頭注射器從高密度向低密度逐層放置,有時相鄰兩層比重相差不大時,可將液放入注射器中,小針頭斜面緊貼管壁,任其自然慢慢流下。
  3、裝樣:樣品體積和細胞濃度根據不同細胞而異,一般加樣體積不宜過大,細胞濃度也不可過高,否則會影響細胞的分離和回收。
  4、離心:由于多層之間密度差別不大,因此離心機加速、降速時要慢,要平穩。
  5、取樣:當所要分離的細胞絕大部分在兩層的界面時,可逐層去除液后收集界面部位的細胞;有時大部分細胞位于層中,則需要逐層收集。收獲含有液的細胞經2次洗滌后可供培養或檢測用。
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